Análise do papel do Papilomavírus humano no contexto do microambiente tumoral do câncer de mama

Abstract

O câncer de mama representa a neoplasia mais comum em todo o mundo. Sugere- se que as infecções virais estão envolvidas com a carcinogênese, especialmente aquelas causadas por genótipos oncogênicos do Papilomavírus Humano (HPV). Tomando o câncer cervical como modelo, após a infecção pelo HPV, ocorre um remodelamento do microambiente tumoral, proporcionando uma alteração pós- infecção com características imunossupressoras. Neste sentindo, este estudo buscou avaliar a expressão dos genes JAK2, STAT3, STAT4, STAT6, FOXO4, em amostras de tumores com e sem a presença do HPV, além de analisar a influência do HPV na linhagem celular de adenocarcinoma de mama (MDA-MB-231), transfectada com os oncogenes E5, E6 e E7 do HPV-16 e co-cultivada com PBMCs através dos seguintes marcadores: anti-CD3, -CD4, -CD8, -CD56, -CD25, -CD14, - B7.1, -B7.2, -HLA-DR. Anticorpos intracelulares anti-FoxP3, -perforina, granzima, -IL- 17, -IFN, -IL-10 também foram utilizados. Para identificação específica da linhagem MDA-MB 231 foi utilizado o anticorpo anti-CD44. As citocinas IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TNF-α, IFN-α e IL-17 foram investigadas. Foi realizada RT-qPCR do cDNA dos tumores de mama e imunofenotipagem das células transfectadas com E5, E6 e E7 e co-cultivadas. Em relação a avaliação do perfil sociodemográfico, a maioria das pacientes que eram HPV-positivas (64%), amamentavam (50%), tinham filhos (64%) e estavam na menopausa (42,86%). A análise de expressão gênica mostrou que na presença do HPV houve menor expressão dos genes STAT4, JAK2, STAT3 e STAT6 e maior expressão em amostras HPV-negativas, principalmente em STAT4. Sugerindo que o HPV pode estar atuando indiretamente na supressão da via JAK/STAT. Já a expressão de FOXO4 foi maior em amostras HPV-positivas, sugerindo que o HPV pode ter papel pró-tumoral no câncer de mama. Houve aumento no número de células TCD4+ quando estimuladas com MDA-MB-231 não transfectadas e transfectadas, especialmente com perfil Treg. Além disso, citocinas intracelulares pró-inflamatórias, como IFN-γ, TNF-α e IL-17 tiveram produção afetada pelas células transfectadas e uma diminuição na atividade citolítica dos linfócitos CD8+ e CD56+ também foi observada na presença de oncogenes do HPV, principalmente com E6 e E7 em células NK, e E5 em células TCD8+. Em conclusão, os oncogenes E5, E6 e E7 do HPV podem atuar regulando negativamente o número e a função de linfócitos e monócitos.