Análise da expressão do gene MYD88 em pacientes com Lúpus eritematoso sistêmico juvenil

Abstract

Lúpus eritematosos sistêmico juvenil (LESj) é uma doença autoimune heterogênea e inflamatória caracterizada por manifestações multissistêmicas, que geralmente se iniciam com maior frequência entre os 12 e 16 anos de idade. Sua patogênese está associada a fatores genéticos e ambientais, resultando na desregulação do sistema imunológico e, consequentemente, numa resposta inflamatória exacerbada. O fator de diferenciação mieloide 88, MyD88, é uma proteína adaptadora. A atividade do MyD88 está associada à transdução de sinais intracelulares que, por sua vez, desencadeiam na ativação de fatores de transcrição que estimulam a produção de citocinas pró-inflamatórias, como IFN-I, TNF-α e IL-6. Sua expressão desregulada pode contribuir para um perfil inflamatório abrupto nas doenças autoimunes, tal como o LESj. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o padrão de expressão do gene MYD88 em pacientes diagnosticados com LESj comparado a controles saudáveis, para investigar sua potencial contribuição na patogênese desta doença. Foram coletadas amostras de sangue de 10 pacientes femininas atendidas no ambulatório de reumatologia do Hospital das Clínicas/ UFPE, e 10 controles saudáveis com respectivas idades e sexo correspondente as pacientes. O grupo de pacientes foi classificado em um grupo com atividade moderada da doença e um único grupo com inatividade e atividade leve. Após a coleta, foi realizado o isolamento de PBMC e o cultivo dessas células em três condições: sem estímulo, estímulo com lipossacarídeo (LPS) e com LPS+Adenosina trifosfato (ATP). Em seguida, foi feita a síntese de cDNA e o ensaio de expressão gênica por PCR em tempo real utilizando sondas Taqman, sendo o gene alvo MYD88 e os genes de referência: ACTB e GAPDH. Por fim, as análises estatísticas foram realizadas pelo programa GraphPad Prism versão 8.0. Apesar de não ser estatisticamente significante, o grupo de pacientes total LESj apresentou expressão de MYD88 2 vezes maior do que os controles saudáveis nas células sem estímulo (Fold Change (FC) = 2.14; p=0.1347). Nas células com estímulo de LPS e LPS+ATP, não houve diferença de expressão entre os dois grupos (FC=1,2; p=0,8184 e FC=1,1; p=0,8955, respectivamente), mas sem significância estatística. Nas células sem estímulo, o grupo de pacientes com inatividade-atividade leve de LESj demonstrou expressão 2 vezes maior do que o grupo de controle saudável (FC=2,33; p=0,0766), sem significância estatística. Nas células com estímulo de LPS e LPS+ATP, não houve diferença de expressão entre os pacientes com inatividade-atividade leve e os controles saudáveis (FC=1.36; p=0.2999 e FC=1.15; p=0.4650, respectivamente) mas sem significância estatística. A partir do estudo, embora tenha-se observado maior expressão do MYD88 entre pacientes LESj totais e com inatividade-atividade leve comparados a controles saudáveis nas células sem estímulo, esses dados não foram estatisticamente significativos. Portanto, a fim de melhor investigar a potencial contribuição do MYD88 na patogênese do LESj, são necessários estudos mais amplos, reunindo mais dados clínicos e com análise pareada, possibilitando resultados mais robustos e de maior validade externa.