Avaliação do padrão de marcação por conjugados de cramoll e pontos quânticos em Aeromonas spp. isoladas do peixe tambaqui (Colossoma macropomum)

Abstract

O gênero Aeromonas é composto por 36 espécies de bactérias Gram-negativas e amplamente distribuídas na natureza. Devido à sua alta complexidade taxonômica, apenas métodos baseados na biologia molecular fornecem dados confiáveis para tal finalidade. Desse modo, a busca por novas metodologias para detecção e diferenciação de espécies de Aeromonas é atualmente um grande desafio para os pesquisadores. Lectinas são proteínas de origem não imunológica capazes de se ligar reversivelmente a carboidratos específicos com diversas aplicações biológicas comprovadas. Com o avanço das pesquisas na área da nanotecnologia, os pontos quânticos (PQs), nanocristais fluorescentes de materiais semicondutores, têm se mostrado como ferramentas promissoras no campo biotecnológico. Com isso, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o padrão de marcação de 5 espécies de Aeromonas isoladas do peixe tambaqui (Colossoma macropomum) por conjugados de Cramoll, uma lectina de sementes de Cratylia mollis, e pontos quânticos com fins de estudar diferenciações no perfil de carboidratos na membrana dessas células. As cepas bacterianas de A. hydrophila, A. veronii, A. caviae, A. dhakensis e A. jandaei, previamente preservadas em ágar triptona de soja e óleo mineral, foram reativadas mediante sucessivas replicações em caldo infusão cérebro-coração e ágar nutriente. PQs de CdTe foram sintetizados em suspensão coloidal a partir de soluções precursoras contendo CdCl2 e telúrio metálico (Te0) reduzido a Te-2 por NaBH4, sendo o ácido mercaptosuccínico utilizado como agente estabilizante. A reação foi realizada em atmosfera inerte de N2 a 90 oC para obtenção de nanopartículas de CdTe emitindo na região espectral do laranja. O conjugado Cramoll-PQs foi preparado por adsorção, sendo a concentração final de lectina a 280 μg/mL. As suspensões bacterianas foram ajustadas a 5 x 106 UFC/mL em 600 nm e incubadas com o conjugado Cramoll-PQ e com o conjugado previamente inibido pelo carboidrato metil-α-D-manopiranosídeo. A análise da marcação foi feita por citometria de fluxo. Células de Aeromonas foram marcadas efetivamente pelo bioconjugado e as espécies A. dhakensis e A. jandaei demonstram possuir uma maior disposição de glicose e manose na sua superfície, sendo necessários mais experimentos para confirmação. Por outro lado, a A. hydrophila foi a menos marcada, o que reforça uma provável especificidade no perfil de carboidratos entre as cepas. A utilização da Cramoll conjugada a PQs de CdTe pode ser considerada uma potencial ferramenta na detecção e diferenciação de Aeromonas, representando uma nova aplicação da gliconanotecnologia no estudo de microrganismos patogênicos.