Análise da associação diferencial de proteínas de ligação a RNA em Leishmania infantum

Abstract

Os tripanossomatídeos são um grupo de protozoários parasitas unicelulares que afetam diversas espécies de animais, inclusive o homem. A transcrição e tradução nesses protozoários é realizada por uma maquinaria complexa diferente dos demais eucariotos. Observa-se que os mecanismos que regem a regulação e expressão gênica desses organismos apresentam alterações incomuns que levantam muitos questionamentos por parte do meio científico. Durante a transcrição, grandes blocos policistrônicos do DNA são transcritos em RNAs mensageiros (mRNAs) imaturos com poucos agentes promotores. Para atingir a maturação, os mRNAs precisam passar pelo trans-splicing e pela poliadenilação, se tornando assim monocistrônicos e passíveis de tradução. Acredita-se que o início da tradução seja o momento mais provável em que os mecanismos de regulação de expressão gênica vão atuar. O processo traducional dos tripanossomatídeos é mediado por Fatores de Iniciação Eucarióticos (EIFs) incluídos e associados aos diferentes complexos da família EIF4F, sendo esta composta por três subunidades principais: EIF4G, EIF4A e EIF4E. A circularização do mRNA ocorre com a atuação da proteína PABP (Poly-A-Binding Protein), unindo a região 3’ UTR poliadenilada com o complexo EIF4F. Para que se efetivem corretamente, os fenômenos anteriormente descritos necessitam da atuação de grupos proteicos que vão auxiliar na regulação do metabolismo do RNA, como as RBPs (RNA-binding proteins) que possuem vários domínios e motivos conservados, como PUFs e Zinc Fingers. O objetivo do estudo foi identificar possíveis parceiros associados a proteínas já identificadas como participantes da tradução mediada pela PABP1, sustentando a hipótese de que os mRNAs são guiados por proteínas acessórias. Foram compiladas quinze espectrometrias de massa obtidas previamente pelo grupo de pesquisa buscando possíveis proteínas co-precipitadas com as já conhecidas como atuantes no processo traducional de tripanossomatídeos. A análise in silico resultou em painéis comparativos ilustrando valores de enriquecimento de cada uma das proteínas encontradas. Por fim, a análise dos painéis juntamente com buscas na literatura atual resultou na escolha das proteínas RBP8, RBP12 e RBP28 para serem trabalhadas e armazenadas no banco de genes do grupo de pesquisa, dada a grande relevância no processo traducional. Foram observadas diversas novas interações gerais e específicas que demonstram a existência de aspectos diferentes nos complexos estudados, configurando assim uma importante base de consulta para direcionamento de futuros estudos a respeito dos mecanismos específicos de tradução mediada pela PABP1 em tripanossomatídeos.