Inativação fotodinâmica de células planctônicas e biofilmes de Candida albicans mediada pela porfirina ZnTnHex-2-PyP4+

Abstract

O fungo Candida albicans é o principal agente etiológico da candidíase tópica, e ainda é capaz de formar biofilmes, os quais são mais resistentes aos antifúngicos do que células planctônicas. O repertório de antifúngicos disponível para candidíase é limitado e isolados resistentes vêm emergindo cada vez mais. Nesse contexto, a terapia fotodinâmica (TFD) vem sendo apontada como alternativa promissora para o tratamento antifúngico. A TFD causa morte microbiana por estresse oxidativo quando um fotossensibilizador (FS) é excitado pela luz em comprimento de onda ressonante a sua absorção. As zincoporfirinas (ZnPs) vêm sendo consideradas FSs atrativos por apresentarem elevada produção de oxigênio singleto, caráter catiônico e estabilidade química. Ademais, a ZnTnHex-2-PyP4+ (ZnP hexil), em particular, pode apresentar aprimorada interação com diferentes tipos celulares devido ao seu caráter anfifílico. Assim, esta dissertação teve como objetivo investigar o efeito fotodinâmico mediado por ZnP hexil em células planctônicas e biofilmes de C. albicans. A cepas de C. albicans ATCC 10231 e ATCC 90028 foram incubadas com diferentes concentrações de ZnP hexil por 10 min e irradiadas por um LED azul (4,3 J/cm2). O efeito fotodinâmico em células planctônicas foi avaliado por contagem de unidades formadoras de colônias. O impacto do tratamento nos biofilmes da cepa ATCC 90028 foi avaliado pelo ensaio de MTT, marcação com iodeto de propídio (IP) e microscopia eletrônica de varredura (MEV). A citotoxicidade foi investigada utilizando células Vero como modelo de célula epitelial de mamífero. As formas planctônicas das cepas ATCC 10231 e ATCC 90028 foram completamente inativadas pela TFD a 0,8 e 1,5 μM de ZnP hexil, respectivamente. A viabilidade celular dos biofilmes de C. albicans ATCC 90028 foi reduzida em ~89% após TFD mediada por 0,8 μM de ZnP hexil, em concordância com a extensa marcação observada nos ensaios de microscopia com IP, sugerindo perda da integridade da membrana e parede celular. As imagens por MEV indicaram ruptura dos biofilmes após TFD, incluindo redução de emaranhados de hifas e da cobertura de células planctônicas no substrato. O tratamento fotodinâmico não apresentou citotoxicidade considerável nas células de mamífero. Em conjunto, os resultados indicam que o protocolo fotodinâmico mediado por ZnP hexil descrito foi bem sucedido na inativação de células planctônicas e biofilmes de C. albicans, e tem potencial para ser explorado para inativação de outras espécies de Candida e isolados resistentes a antifúngicos.