Clonagem e expressão do antígeno sintético E5 multiepítopos 2 de HPV 16 em Leishmania tarentolae

Abstract

O Papilomavírus humano (HPV) é um vírus de tamanho pequeno, capsídeo icosaédrico, não envelopado e com DNA circular de fita dupla que apresenta tropismo pelo epitélio humano. Sabe-se que a infecção persistente por HPVs de alto risco é condição necessária para o desenvolvimento do câncer de colo uterino, e possui relação com carcinomas genitais, de orofaringe e pulmão. A proteína E5 do HPV 16 está associada ao desenvolvimento do câncer cervical, e contribui para a carcinogênese através de diferentes vias. Devido a expressão de E5 nos estágios iniciais da transformação celular, vacinas terapêuticas direcionadas a essa proteína podem prevenir lesões pré-malignas de progredirem para câncer cervical invasivo. Porém, nenhuma estratégia até então mostrou-se totalmente eficaz contra os tumores associados ao HPV. Dentre os tipos de vacinas existentes, o uso de Leishmania tarentolae como vetor vacinal tornou-se uma estratégia promissora, devido sua capacidade imunoestimulante. Nesse sentido, o presente trabalho tem como objetivo a produção da proteína E5 multiepítopos 2 (E5-M2) de HPV 16 em Leishmania tarentolae, como parte de uma estratégia vacinal terapêutica contra o câncer cervical. Inicialmente, o gene sintético E5-M2 foi clonado no vetor de expressão pSP-BT1.YNEOα, gerando a construção pSP-BT1.YNEOα_E5-M2. Células de L. tarentolae foram então transfectadas por eletroporação com a construção pSP- BT1.YNEOα_E5- M2 e selecionadas em BHI acrescido do antibiótico G418. O extrato protéico proveniente da lise dos protozoários transfectados foi submetido a SDS-PAGE, sendo observada a produção da proteína E5-M2. Posteriormente, as linhagens recombinantes de Leishmania tarentolae poderão ser testadas como uma vacina terapêutica contra o câncer cervical em ensaios pré-clinicos in vivo.