Avaliação do perfil de citocinas séricas e efeito imunomodulador in vitro de um novo derivado tiazolidínico LPSF/JB-20 em pacientes portadores de espondilite anquilosante

Abstract

A espondilite anquilosante (EA) é uma doença crônica de caráter inflamatório que ao longo do tempo pode levar ao desenvolvimento de sindesmófitos e anquilose da coluna. Os tratamentos atuais são capazes de melhorar os sintomas, mas não impedem o dano estrutural, sobretudo em pacientes com atraso no diagnóstico. Os mecanismos de remodelação óssea são complexos e pesquisas vêm sendo realizadas com o intuito de esclarecer melhor a doença e encontrar novos tratamentos para os pacientes. Estudos com pacientes EA identificaram que o PPARγ pode atuar como um mediador provável dos efeitos das citocinas durante a inflamação e no processo de remodelação óssea. Os derivados tiazolidínicos (TZDs) vêm sendo estudados por atuar como agonistas PPARγ. Diante desse contexto nosso trabalho se propõe avaliar o perfil de citocinas no soro e no sobrenadante de cultura de PBMC de pacientes e voluntários sadios para investigar a resposta ao tratamento in vitro de novos derivados tiazolidínicos, o LPSF/JB-20. As citocinas IL-1β, IL-6, IL-17A, IL-18BP, IL-18 total, IL-23, OSM, sOSMR e sGP130 presentes no soro de 130 pacientes EA e 130 voluntários sadios foram avaliadas por kit comerciais de ELISA sanduíche. A atividade imunomoduladora do TZD foi avaliada no sobrenadante de cultura de PBMC estimulada com fitohemaglotinina-M e a dosagem das citocinas IL-6, IL-10, IL-17A, IFN-γ, TNF-α foram avaliadas. Ensaios de diferenciação adipogênica e modelagem molecular foram avaliadas para determinar o mecanismo de ação ao PPARγ. Os resultados mostram que a expressão de sOSMR, sGP130 e IL-18BP estava significativamente reduzida e a de IL-18 elevada, comparado com voluntários sadios. A expressão da OSM foi detectada através de Wester blotting e sua expressão foi significadamente maior comparado aos voluntários sadios. As demais citocinas avaliadas, não apresentaram expressão no soro da população de estudo. O docking molecular mostrou que em termos de afinidade predita, o composto LPSF/JB-20 obteve uma melhor pontuação que a rosiglitazona, ao se ligar no PPARγ. O derivado tiazolidínico apresentou baixa citotoxicidade em PBMC de voluntários sadios além de apresentar ação imunomoduladora de forma significativa das citocinas IL-6, IL-10, IL-17A, IFN-γ, TNF-α. Na diferenciação adipogênica o LPSF/JB-20 apresentou uma baixa acumulação do corante nas células transformadas de adipócitos derivadas da maturação em meio diferenciado na linhagem 3T3-L1, em comparação com a rosiglitazona, indicando que o tratamento com o LPSF/JB-20 pode atuar de forma independente de PPARγ. Dessa forma, o presente estudo demonstrou que pacientes com EA apresentam um perfil diferenciado de produção de sOSMR, sGP130, IL-18 e IL-18BP em comparação com indivíduos saudáveis. O tratamento da doença, para reverter o processo de calcificação impróprio, ainda é um desafio, mas a avaliação dos efeitos in vitro de novas moléculas fornecem subsídios para o futuro desenvolvimento de ensaios clínicos.