Bioprospecção de substâncias com potencial antimicrobiano produzidas por fungos filamentosos isolados do solo

Abstract

Fungos filamentosos possuem potencial biotecnológico por produzirem metabólitos com diversas atividades biológicas. A adaptação dos micro-organismos às drogas conduz ao desenvolvimento de cepas resistentes, reduzindo a eficácia de terapias. Este trabalho objetivou fazer uma bioprospecção de substâncias antimicrobianas produzidas por fungos filamentosos isolados do solo de um coqueiral localizado nas Várzeas de Sousa – PB. A identificação dos fungos se deu por microcultivo em lâmina e técnicas moleculares. O potencial antimicrobiano foi investigado pelas técnicas de bloco de gelose e difusão em disco. As condições de cultivo de Aspergillus terreus URM 7731 foram avaliadas: meio, pH e tempo de cultivo. A cada 24h um frasco foi retirado para avaliar crescimento celular, pH e atividade antimicrobiana frente a cepas padrão e multidrogas resistentes (MDR) de Staphylococcus aureus. O líquido metabólico foi extraído com solventes orgânicos para avaliar a melhores condições de extração através da investigação das Concentrações Mínimas Inibitória e Bactericida (CIM/CMB). A interação do extrato bruto (EBDic) e antibióticos utilizados na clínica foi avaliada por checkerboard. Avaliou-se a capacidade de EBDic em inibir a formação de biofilme e o potencial antioxidante. EBDic foi fracionado por cromatografia em coluna. A fração que apresentou melhores resultados de CIM/CMB e EBDic foram submetidos a espectrometria de massas os resultados desta análise foram utilizados para construir as redes moleculares. Os 30 fungos isolados foram identificados como: A. terreus (8/30), A. fumigatus (7/30), A. niger (7/30), Paecillomyces variotii (4/30), A. fischeri (3/30) e A. nidulans (1/30). A. terreus URM 7731 apresentou os melhores resultados de inibição frente a S. aureus (13,0 mm: bloco de gelose; 20,5 mm: disco-difusão). As melhores condições de cultivo foram: meio extrato de malte a 1,5%, pH 8,0, 96 h. O solvente orgânico que melhor extraiu os metabólitos foi diclorometano (CIM e CMB=31,25μg/mL para S. aureus padrão e 500μg/mL para S. aureus MDR). EBDic reduziu a CIM de antibióticos frente a S. aureus multidrogas resistentes, apresentando efeitos sinérgicos ou parcialmente sinérgicos. Na concentração de 250μg/mL, EBDic reduziu em 20% a capacidade de S. aureus padrão produzir biofilme. A fração F-15 apresentou os menores valores de CIM/CMB em relação as demais frações. EBDic apresentou 98,12% de sequestro de radicais livres ABTS, representando boa atividade antioxidante. A rede molecular gerada de EBDic e de F-15 no modo negativo originou 376 nodos, destacando-se a presença de emodina, butirolactona I, sulchrin e metil dicloroasterrate. No modo positivo, a rede gerou 731 nodos, destacando-se metil asterrate e ácido astérico. A. terreus URM 7731 possui atividade antimicrobiana contra S. aureus padrão e MDR, demonstrando perspectivas sobre o seu potencial biotecnológico. Novos experimentos são necessários a fim de isolar e purificar os compostos que possuem potencial antimicrobiano.