Desenvolvimento de um imunossensor nanoestruturado para detecção do H-FABP

Abstract

O infarto agudo do miocárdio (IAM) é uma das principais causas de morte no mundo, sendo responsável por milhões de óbitos por ano. O desenvolvimento de testes rápidos e quantitativos que auxiliem no diagnóstico precoce do IAM apresenta-se como imperativo. Recentemente, o H-FABP vem sendo apontado como um eficiente marcador precoce de isquemia miocárdica, o que o torna importante no diagnóstico precoce do IAM. Nos últimos anos, os biossensores têm se revelado como um dos melhores sistemas de diagnóstico rápido devido sua alta sensibilidade, praticidade e possibilidade de análise em tempo real. O uso de nanomateriais, aliados à polímeros condutores e corantes com propriedades catalíticas, aprimoram a superfície eletroativa do biossensor, gerando um maior desempenho de sensibilidade para detecção do H-FABP. Nesta tese um imunossensor eletroquímico baseado em filme de politionina (PTh) e nanotubos de carbono (NTC) funcionalizados com azul de metileno (MB) foi desenvolvido para detecção do H-FABP, um importante marcador precoce do infarto agudo do miocárdio. O uso combinado destes nanomateriais possibilitou um melhor desempenho de sensibilidade para detecção do H-FABP. Para construção da plataforma sensora, eletrodos de ouro foram modificados através da eletropolimerização da PTh. Posteriormente, um filme nanoestruturado foi montado através da técnica de dropcasting, com uma solução de NTCs carboxilados funcionalizados com o MB (NTC@MB). Os grupos carboxilas dos nanotubos expostos na plataforma sensora foram explorados para imobilização orientada dos anticorpos anti-H-FABP. Após imobilização dos anticorpos, os sítios ativos não-reativos do filme foram bloqueados com uma solução de glicina (100mM) pH.7,4. A caracterização do sensor foi realizada utilizando a técnicas de voltametria cíclica. O filme de PTh-NTC@MB apresentou boa estabilidade quando submetido a sucessivas leituras voltametricas, não existindo deslocamento significativo dos picos (CV% para Ipa e Ipc de 3% respectivamente). A resposta amperométrica foi obtida por voltametria cíclica, mostrando respostas lineares e limites de detecção para o H-FABP, respectivamente, entre 2,5 a 25,0 ng/mL e 3,1 ng/mL em amostras tamponadas; e entre 5,0 a 25,0 ng/mL e 4,5 ng/mL em soro humano. A boa reprodutibilidade e a faixa clínica obtida com esse imunossensor suportam sua utilidade como uma ferramenta potencial para testes de diagnóstico precoce do IAM, com a vantagem de ser um método passível de portabilidade como os testes de tira lateral.