Desenvolvimento e validação de métodos bionalíticos para dosagem de antimicrobianos em plasma humano

Abstract

A política nacional de medicamentos genéricos (Lei n° 9.787 de 10 de fevereiro de 1999) é um instrumento que vem ampliando o acesso a medicamentos de qualidade (seguros e eficazes). Para tanto é necessário que métodos de análise em matrizes biológicas com uma maior seletividade e sensibilidade para quantificação de fármacos e/ou metabólitos sejam desenvolvidos e validados para posterior utilização em estudos de farmacocinética comparada (bioequivalência). No Brasil ainda é escasso o número de profissionais com formação acadêmica (Técnico-científica) para a condução de estudos de biodisponibilidade comparada, sobretudo na etapa analítica. Com o intuito de colaborar com a implementação desta política, o presente trabalho tem como objetivo desenvolver e validar métodos de análise de duas classes de antibióticos (Sulfonamidas e Fluoroquinolonas) em plasma humano e posterior aplicação na avaliação biofarmacêutica de diferentes formulações. Durante a formação foi realizado um aumento da complexidade das técnicas utilizadas desde a extração líquido-líquido (ELL) e utilização de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por absorção no ultravioleta (CLAE-UV), extração em fase sólida (EFS) com auxílio de CLAE-UV e EFS seguida de cromatografia líquida de alta eficiência com detecção por espectrometria de massas em tandem (CL-EM/EM). O desenvolvimento e validação de métodos bioanalíticos vai desde a seleção de sistemas cromatográficos e de detecção, técnica de extração e clean-up que gerem cromatogramas de qualidade, avaliação da estabilidade de fármacos na matriz biológica até o cumprimento dos critérios de aceitação das seqüências analíticas contendo amostras dos voluntários. Dentre as fluoroquinolonas o objeto de estudo foi o norfloxacino (NFX) comprimido de 400mg. Para extração e clean-up das amostras em plasma humano utilizou-se o método por ELL seguido de quantificação por CLAE-UV. Em meio às muitas sulfonamidas o objeto de estudo foi composto de duas formulações da associação de sulfametoxazol + trimetoprima (SMZ + TMP). Determinou-se simultaneamente a SMZ + TMP em plasma humano após administração da forma farmacêutica (FF) cápsula (400mg + 80mg) através de método de extração e clean-up em fase sólida off-line com posterior quantificação por CLAE-UV e após a administração da FF suspensão (400mg + 80mg / 10mL) por CL-EM/EM com ionização à pressão atmosférica através da técnica de eletronebulização ( Electrospray, ESI ) em modo positivo. A biodisponibilidade dos fármacos, a parir das formas farmacêuticas, foi avaliada através da análise estatística de parâmetros como Área sob a Curva (ASC), concentração plasmática máxima (Cmáx) segundo as normas (RE 898 de 29 de maio de 2003) da ANVISA. Os métodos analíticos foram desenvolvidos e validados segundo a RE 899 de 29 de maio de 2003 da ANVISA mostrando-se lineares, precisos, exatos e robustos frente ao elevado throughput de amostras. O método EFS-CL-MS/MS mostrou-se mais robusto pela maior limpeza dos interferentes da matriz plasmática e pelo menor tempo de análise (2.5 min) por amostra, diminuindo os resíduos de solventes da fase móvel bem como no procedimento de extração mostrando-se menos tóxico aos analistas e ao meio ambiente. Todos os métodos desenvolvidos se configuraram como ferramentas suficientemente capazes de discriminar a biodisponibilidade comparada dos medicamentos testados