Avaliação de formulações tópicas contendo metronidazol e lapachol sob a ótica dos métodos alternativos

Abstract

A experimentação com animais nas pesquisas é umas das formas de avaliar a eficácia e segurança de produtos farmacêuticos, surgindo a necessidade do desenvolvimento, implementação e divulgação de métodos alternativos que substituíssem total ou parcialmente o uso de animais. O teste in vitro mais utilizado para avaliar a absorção sistêmica de produtos aplicados topicamente é absorção cutânea in vitro e o modelo de pele para tal finalidade mais usado é a pele de porco. Outros testes consistem na identificação do potencial irritante de produtos, como os testes de opacidade e permeabilidade em córnea bovina (BCOP) e o da membrana cório-alantóide do ovo embrionado de galinha (HET-CAM). Diante disto, neste estudo, formulações tópicas contendo metronidazol 0,75% e lapachol 0,5% foram avaliadas sob a ótica dos métodos alternativos. Para tanto, foi realizada a caracterização fisico-química (pH, viscosidade, espalhabilidade e teor) e estudo de liberação in vitro das formulações. O estudo de absorção cutânea foi realizado com células de Franz baseado no guia 428 da OECD, com inclusão da avaliação da dermatofarmacocinética (DPK) in vitro, utilizando as diferentes partes de pele do porco (dorso, ventre, barriga) como biomembrana, com prévia análise microscópica das peles e in vivo com 14 participantes. O BCOP foi conduzido baseado no guia OECD 437 utilizando córneas bovinas e o HET-CAM com ovo embrionado de galinha segundo o ICCVAM. Os dados das avaliações das formulações de metronidazol e lapachol demonstraram comportamento pseudoplástico e modelo cinético de Higuchi. As análises de absorção cutânea para o metronidazol mostraram perfil de distribuição semelhante do fármaco, com maior concentração obtida no estrato córneo, concentração média na epiderme e derme e nenhuma quantificação no líquido receptor. Mediante avaliação estatística da correlação dermatofarmacocinética in vitro/in vivo não foi observada diferença na utilização da pele da região dorsal ou ventral do porco. Para o lapachol foi encontrado concentrações significativas no líquido receptor e estrato córneo, com maior quantificação do fármaco na epiderme e derme. Foi observado para o lapachol o mesmo perfil de distribuição em todas as regiões de pele de porco investigadas. A falta de variabilidade significativa das regiões de peles investigadas, a partir das características de cada fármaco, foi evidenciada considerando que o mesmo perfil de distribuição foi mantido independente da região da pele utilizada, o que demonstra que as diversas partes da pele de porco estão aptas para uso nos estudos de absorção cutânea (in vitro). Uma padronização da região de pele com validação dos protocolos antes de iniciar os experimentos é recomendada para obter dados confiáveis e reprodutíveis. Para a formulação do metronidazol não foi evidenciado potencial irritante através dos métodos de BCOP e HET-CAM, mas para o lapachol foi exibido resultado de irritante moderado pelo HET-CAM e não determinado pelo BCOP. Todos os métodos alternativos demonstraram reprodutibilidade e eficiência na avaliação da segurança destas formulações convencionais.