Avaliação da atividade radioprotetora de flavonóide isolado de Conocarpus erectus Linneus (Combretaceae) em linfócitos humanos irradiados in vitro

Abstract

Plantas do manguezal possuem importantes substâncias bioativas, que apresentam efeito radioprotetor. Uma importante espécie é o Conocarpus erectus L. (Combretaceae) apresenta em sua composição, flavonoides, um grupo de metabólitos secundários da classe dos polifenóis que possuem propriedades antioxidantes. Até o final do século XIX, a ação desses compostos era vista como irrelevante, pois os danos da radiação não eram bem conhecidos. As radiações ionizantes interagem com a célula podendo causar danos ao DNA, originando alterações que podem levar até a sua morte. A radioatividade e as radiações ionizantes fazem parte do meio ambiente, no entanto, não são percebidas naturalmente pelos órgãos dos sentidos do ser humano, diferindo-se da luz visível e do calor. Este estudo isolou o flavonoide majoritário do extrato aquoso de folhas de C. erectus (EAFCe), e investigou sua atividade citotóxica e explorou a possível ação radioprotetora em linfócitos humanos expostos à radiação gama. Inicialmente, a coleta do material vegetal foi realizada no manguezal do município de Itamaracá/PE (distrito de Vila Velha). O EAFCe foi preparado por infusão em água destilada (40º C por 30 min), liofilizado e armazenado em temperatura ambiente. A análise fitoquímica do EAFCe foi realizada por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Na purificação e isolamento do flavonoide do EAFCe foi utilizada a CLAE preparativa, com detecção por luz ultra violeta (UV) e espectometria de massa. Para avaliação da citotoxicidade e análise de micronúcleo, células mononucleares de sangue periférico humano foram obtidas a partir de 4 mL de sangue de 4 voluntários e associadas a flavonoide isolado do EAFCe, em concentrações de 1, 10, 50 e 100 μg/mL, pelo teste do MTT (3-(4,5-dimetiltiazol-2yl)-2,5-difenil brometo de tetrazolina). O potencial efeito radioprotetor do flavonoide isolado de EAFCe, em concentrações de 1 e 0,5 μg/mL, foi determinado através da análise microscópica de linfócitos humanos (in vitro) expostos à radiação gama com dose de 3 gray (Gy) proveniente de um fonte de cobalto-60 (Gammacell 220 Excel) de alta taxa de dose (2,181 kGy/h). Foram contabilizados micronúcleos no total de 300 células para cada grupo (irradiado e controle). A análise estatística do efeito radioprotetor foi realizada através do teste estatístico do Qui-quadrado de Pearson com valor de ≤0,05. A pesquisa fitoquímica do EAFCe mostrou a presença de flavonoides. Na análise da citotoxicidade, 98% dos linfócitos humanos nao apresentaram morte celular após o tratamento com o flavonoide isolado do EAFCe, mostrando resultado estatístico significativo na concentração ideal de 1μg/mL. A ocorrência de flavonoides em plantas é difundido através das análises de ressonância magnética e 13C. Neste trabalho, os estudos de RMN de vários sinais são relatados pela atribuição completa de próton e carbono, por uma análise espectral detalhada. Os resultados referentes ao potencial efeito radioprotetor mostraram que a presença de micronúcleos em linfócitos irradiados e não irradiados, tratados com o flavonoide isolado de EAFCe na concentração de 1,0 μg/mL ( ≤0,05), foram de 5,7% e 2,7%, respectivamente, sendo estes percentuais quando comparados aos demais grupos (controle, doxorribicina e demais concentrações do composto). A partir dos resultados desta pesquisa, o flavonoide isolado do extrato aquoso de Conocarpus erectus L. (Combretaceae), na concentração de 1,0 μg/mL, demonstra potencial como um radioprotetor natural, não demonstrando toxicidade celular, podendo vir a ser utilizado nas áreas médica e farmacêutica.