Construção de candidatos a vacinas de DNA baseados nos genes prM e envelope do Zika vírus

Abstract

Diretamente associado ao surto de casos de malformações fetais e ao aumento de casos de adultos afetados com a Síndrome de Guillain-Barré na América Latina, e especialmente no Brasil, o Zika vírus (ZIKV) é alvo de diversas pesquisas em todo mundo. Assim como o vírus da Dengue e da Febre Amarela, o ZIKV pertence a família Flaviviridae e tem como principais vetores de transmissão os mosquitos do gênero Aedes, mas pode ser transmitido por outras vias tais como por relações sexuais e fluídos corporais. Desse modo, e frente a sua rápida disseminação, o desenvolvimento de estratégias profiláticas e terapêuticas contra a infecção por ZIKV é de fundamental importância. Atualmente, não há ainda nenhuma vacina profilática disponível contra o ZIKV. Assim, neste trabalho foram desenvolvidos candidatos a vacinas de DNA baseados nos genes prM e Envelope que foram selecionados em razão da resposta imune humoral que são capazes de elicitar. Três construções foram desenvolvidas neste estudo: a primeira contendo a sequência completa do Envelope (E), a segunda contendo apenas os últimos 34 aminoácidos da região C-terminal de prM e a sequência completa do Envelope (prM34.E), e a terceira trata-se do Envelope com uma deleção de seus os últimos 108 aminoácidos da região C-terminal (EnvΔ108). Todas as construções foram clonadas no vetor pGEM-T easy, subclonadas no vetor de expressão para células de mamíferos pVAX1 e transfectadas em culturas de células Vero. Após as transfecções, a detecção das proteínas de interesse foi realizada por western blot e a verificação da transcrição gênica por meio de RT-PCR. Os resultados obtidos demonstraram a expressão de E, mas não foi possível a detecção da expressão de prM34.E e EnvΔ108. De modo similar, apenas foi possível a detecção da proteína E. Sendo, portanto, necessárias otimizações aos protocolos para futuras detecções. A eficiência da construção E como candidato vacinal deve ser avaliada em futuros ensaios imunológicos em animais.