Caracterização do perfil de glicoproteínas presentes em soros de indivíduos sadios e pacientes com dengue clássica e hemorrágica utilizando lectina de semente de Cratylia mollis (Cramoll 1,4)

Abstract

As lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imunológica, capazes de interagir de forma reversível com carboidratos através de pelo menos um sítio de ligação, bem como aglutinar células através de dois ou mais sítios de ligação, aglutinam células vegetais e/ou animais e precipitam glicoconjugados. Essa propriedade promoveu a inserção das lectinas em diversas aplicações na área biomédica. Na atualidade, a dengue constitui um dos problemas mais graves de saúde pública, sendo mais prevalente em pessoas da região tropical. Neste trabalho foi investigada a utilização da lectina Cramoll 1,4 imobilizadas em suporte de afinidade para o isolamento de glicoproteínas de soro de indivíduos sadios (IS) e de pacientes com dengue clássica (DC) e dengue hemorrágica (DH), bem, como análises proteômica das amostras. As lectinas da semente de Cratylia mollis (Cramoll 1,4, específicas para D-glicose) foram, previamente, imobilizadas em suporte de sepharose CL-4B. Os soros IS, DC e DH foram aplicados a uma coluna de cromatografia contendo Cibacron Blue F3GA para a depleção eficaz de albumina de soro humano. Após a depleção, a fracção não adsorvida do soro foi aplicada em uma coluna contendo Cramoll 1,4-Sepharose e equilibrada com NaCl 0,15 M, em seguida a coluna foi eluída com uma solução de D-glucose bioespecífica a 0,3 M em NaCl a 0,15 M. As fracções foram recolhidas e avaliadas quanto à concentração de proteína e do perfil electroforético e análise proteômica. Foram identificadas aproximadamente 320 proteínas, sendo que 91 dessas proteínas foram comuns aos três grupos de estudo e também foram detectadas proteínas exclusivas para cada condição: 62 para IS, 31 para DC e 49 para DH. Cramoll 1,4 imobilizada mostrou-se eficiente para purificação de glicoproteínas nos diferentes soros de pacientes com dengue, apresentando um perfil de seletividade característico para os diferentes soros de IS, DC e DH. As lectinas imobilizadas podem ser consideradas como uma potencial ferramenta para o isolamento de moléculas com interesse biotecnológico.