Identificação polifásica e perfil de sensibilidade de isolados de Sporothrix sp. estocados na coleção de cultura URM

Abstract

Desde 2007, o fungo termodirmórfico Sporothrix schenckii (agente da esporotricose) não é mais considerado um táxon único, mas sim um complexo de espécies, denominado Complexo Sporothrix schenckii. O presente trabalho teve como objetivo revisar taxonomicamente agentes da esporotricose estocados na Coleção de Culturas URM, como Sporothrix schenckii, S. fungorum e Sporotrichum schenckii, além de obter o perfil de sensibilidade destes aos antifúngicos convencionais e compostos bioativos, Miltefosina e extrato de Schinus terebinthifolius (aroeira), bem como verificar o potencial inibitório de compostos de tiofeno (6CN10, LNN-03, LNN- 07, LNN-08 e LNN-09), Miltefosina e extrato de Anadenanthera macrocarpa (angico vermelho) em relação à produção de melanina dessas cepas. Testes fenotípicos de assimilação de carboidratos (Rafinose e Sacarose), morfologia de conídios, diâmetro da colônia em meio BDA e termotolerância a 37º C foram realizados. A análise genotípica baseou-se no sequenciamento parcial do gene da calmodulina e sequenciamento do gene beta-tubulina. Os testes de sensibilidade antifúngica basearam-se no método de microdiluição em caldo estabelecido pelo documento CLSI M38-A2. Para verificar a atividade dos compostos frente à produção de melanina, inóculos das cepas foram colocados em meio mínimo em ágar (Glicose 15mM, MgSO₄ 10mM, KH₂PO₄ 29,4 mM, Glicina 13mM e Tiamina 3mM) adicionado dos compostos. A análise fenotípica mostrou que dois isolados apresentam características de Sporothrix schenckii e 11 de S. mexicana, de acordo com a chave de identificação fenotípica proposta. As análises genotípicas identificaram as espécies Sporothrix schenckii, S. chilensis e S. mexicana dentre os isolados. S. schenckii, S. mexicana e S. chilensis apresentaram sensibilidade ao Itraconazol. Apenas um isolado de S. chilensis apresentou resistência à Anfotericina B. Miltefosina e o extrato de S. terebinthifolius apresentaram atividade frente a todos os isolados, com CIM´s de 0,25 a 2 μg/mL para Miltefosina, e CIM´s de 1 a 4 μg/mL para o extrato. Foi constatado que todos compostos de tiofeno testados foram capazes de inibir a produção de melanina. As ferramentas moleculares empregadas neste estudo, somadas à análise das características fenotípicas dos isolados estudados, permitiram uma identificação acurada destes, permitindo a requalificação dessas amostras da Coleção, o que representa importância no estudo da micologia no Brasil, especialmente no que diz respeito ao Complexo Sporothrix schenckii. Os resultados dos testes de sensibilidade e de inibição da produção de melanina demonstraram ação eficaz dos compostos testados, podendo estes compostos apresentarem-se como opções no tratamento da esporotricose futuramente, após estudos baseados em modelos animais, e que verifiquem a toxicidade destes.