Imunização genética para o controle de papilomaviroses: construção de um vetor vacinal baseado no Gene L2 do papilomavírus bovino tipo 1

Abstract

A bovinocultura é um dos principais destaques do agronegócio brasileiro no cenário mundial. No entanto, algumas doenças vêm causando prejuízos consideráveis entre elas está a papilomatose bovina, uma doença infectocontagiosa, de caráter tumoral, com etiologia relacionada a infecção pelo papilomavírus bovino (BPV) que se caracteriza pela formação de tumores em tecidos da pele e mucosa. Hoje se conhecem 11 tipos diferentes de Papilomavírus bovino, sendo os BPvs tipos 1, 2 e 4 oncogênicos. Até o momento não existe vacinas para o controle ou tratamento das papilomaviroses. Diferentes estudos vêm demonstrando que a proteína L2 pode ser uma candidata ao desenvolvimento de estratégias vacinais profiláticas contra o BPV. Neste trabalho, tivemos como objetivo construir um vetor vacinal a partir do plasmídeo pCINeo (Promega®) e do gene L2 de BPV1, avaliando in vitro a expressão do antígeno L2 em células de mamíferos. O gene L2 foi amplificado pela técnica de PCR a partir do genoma completo de BPV1, com uso de oligonucleotídeos específicos contendo um epítopo AU1 no primer forwarde posteriormente clonado em vetor de passagem pGEM-T Easy (Promega®) e subclonado no vetor de expressão pCIneo, gerando a construção pCIL2B1. O plasmídeo foi transfectado in vitroem células 293 para análise funcional da expressão de L2. Os resultados obtidos confirmaram a construção pCIL2B1 por PCR e sequenciamento. A capacidade desta construção expressar o gene L2 e produzir a respectiva proteína em células de mamífero foi confirmada por RT-PCR e western blot (usando anticorpo contra o epítopo AU1).