Cinética de coagulação da lectina de sementes de Moringa oleifera (WSMoL) em presença de carboidratos de carboidratos e íons

Abstract

Lectinas são proteínas ligadoras de carboidratos e com atividade hemaglutinante (AH). Sementes de Moringa oleifera são utilizadas no tratamento de água e contêm uma lectina solúvel em água (WSMoL) com atividade coagulante. O objetivo deste trabalho foi avaliar a cinética de coagulação promovida por WSMoL através de medidas de absorbância (densidade óptica) e variação de resistência elétrica na interface eletrodo-solução, na ausência e presença de carboidratos e íons. Extrato aquoso (10%, p/v) de sementes foi fracionado com sulfato de amônio (60% de saturação) e o precipitado foi aplicado em coluna de quitina equilibrada com NaCl 0,15 M. WSMoL foi eluída com ácido acético 1,0 M e caracterizada quanto à massa molecular nativa, perfil em SDS-PAGE e ponto isoelétrico (PI). A atividade coagulante foi determinada empregando-se modelo de água turva com caolin a 1% em água de torneira. A AH e atividade coagulante de WSMoL foram também avaliadas na presença de Nacetilglicosamina, glicose e frutose em diferentes concentrações (25, 50, 100, 200 mM) e soluções de sais de cálcio e magnésio (20 mM). WSMoL nativa apresentou massa molecular 59,4 kDa. Em SDS-PAGE, foram observados três peptídeos com aproximadamente 30, 20 e 10 kDa. O PI determinado para WSMoL nativa foi de 5,5. A AH de WSMoL foi inibida por todos os carboidratos nas concentrações testadas (exceto frutose a 25 mM) e estimulada pelos íons cálcio e magnésio. A atividade coagulante de WSMoL foi demonstrada por redução da absorbância da solução de caolin e redução da resistência elétrica do meio aquoso em presença da lectina. A incubação da lectina com carboidratos nas concentrações que inibiram a AH ou com íons cálcio e magnésio promoveu a redução da atividade coagulante de WSMoL, demonstrada pela baixa eficiência na redução da absorbância e resistência elétrica do meio aquoso. A incubação com carboidratos na concentração de 200 mM aboliu a atividade coagulante da lectina. Em conclusão: 1) WSMoL nativa é uma proteína aniônica oligomérica; 2) a redução de absorbância e resistência elétrica promovida por WSMoL provavelmente envolve desestabilização de partículas em suspensão, seguida da formação de complexos entre WSMoL e as partículas; 3) a presença no meio aquoso de carboidratos inibidores da AH de WSMoL resulta em diminuição da atividade coagulante; e 4) cátions Ca2+ e Mg2+ estimularam a AH mas prejudicaram a atividade coagulante de WSMoL.