Produção e caracterização parcial de colagenase de Candida albicans URM 3622

Abstract

Colagenases são enzimas proteolíticas capazes de degradarem diferentes tipos de colágeno e apresentam alta especificidade a estas moléculas. Dentre os vários organismos capazes de produzirem estas enzimas, estão as leveduras. As colagenases têm as mais variadas aplicações. Destacam-se as aplicações na indústria de fármacos, onde são utilizadas no tratamento de cicatrizes hipertróficas, na indústria de cosméticos (dermocosméticos), usadas no tratamento de acnes e rugas, e na indústria alimentícia, no amaciamento de carne. O presente trabalho objetivou a seleção de espécies do gênero Candida, produtoras de colagenase extracelular, a determinação das condições de cultivo para a produção da enzima através de processo fermentativo e a caracterização bioquímica parcial da colagenase. Para isto, foram realizados experimentos de fermentação com o auxílio de planejamentos estatísticos (fracionário- 26-2 e completo-23) para a seleção das melhores condições de produção. No estudo de seleção identificou-se que a espécie Candida albicans URM3622 apresentou maior atividade colagenolítica qualitativa no meio ágar-gelatina (halo = 25 mm), e quantitativa (5,0 U/ml) utilizando azocoll como substrato. A análise dos dados do planejamento estatístico fracionário (26-2) demonstrou que entre as variáveis estudadas (pH, tempo de produção, velocidade de agitação, temperatura, concentrações do inóculo e do substrato), a concentração do substrato (gelatina) e a velocidade de agitação foram as variáveis mais significativas para a produção da colagenase. Com base nestes resultados foram executados dois planejamentos estatísticos completos (23) sucessivos nos quais foram estudados, a concentração do substrato, a velocidade de agitação e o pH. Estes planejamentos demonstraram que todas as variáveis foram significativas para a produção da enzima e que a produção máxima foi obtida utilizando o pH 7,0, a velocidade de agitação de 160 rpm e a concentração de substrato de 2%. Sob estas condições foi obtida uma atividade colagenolítica de 6,7 ± 0,2 (U/ml). No estudo da caracterização parcial da enzima observou-se que a enzima apresentou o pH 8,2 como ótimo para a sua atividade e a temperatura ótima de 45 ºC. A colagenase mostrou-se estável aos valores de pH na faixa de 7,2 a 8,2 e à temperatura na faixa de 28 °C a 45 °C. Os resultados obtidos demonstram que a Candida albicans (URM3622), é uma fonte viável de colagenase, sendo assim a sua produção é de interesse para as indústrias farmacêutica, cosmética e alimentícia